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非变性PAGE制胶及电泳试剂盒(常规蛋白)图片
产品货号:
KD2076
中文名称:
非变性PAGE制胶及电泳试剂盒(常规蛋白)
英文名称:
Native-PAGE Gel Preparation Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本试剂盒提供非变性PAGE凝胶制备以及电泳全套试剂。可以根据需求配制各种浓度的非变性分离胶,同时提供5×非变性蛋白上样液和5×非变性电泳缓冲液用以满足不同分子量的酸性蛋白电泳实验,无需再准备试剂,使用方便,经济实惠。如需小量制备多种浓度变性分离胶请选购SDS-PAGE凝胶制备试剂盒产品。常规蛋白指的是酸性蛋白,不适用于碱性蛋白。




组分规格保存
30% Acr-Bis(29:1)100mL2~8℃
4×分离胶缓冲液(pH8.8)100mLRT
4×浓缩胶缓冲液(pH6.8)50mL
APS干粉0.1g×5
5×非变性非还原上样液1mL
5×tris-甘氨酸电泳缓冲液(干粉)1L
TEMED1mLRT,避光

保存:按标签指示条件保存,有效期一年。


  • APS为结晶性粉末,2~8℃储存,使用前每支加入1mL蒸馏水即为10% APS溶液,现配现用最佳,溶液用后-20℃可储存2个月。APS如出现严重结块,即已变质。
  • 将5×tris-甘氨酸电泳缓冲液(干粉)加入到900mL的蒸馏水中,搅拌溶解之后,定容到1L,即得5×电泳液,常温可保存半年。使用前用蒸馏水稀释到1×。



  • APS溶液常温不稳定,取用后立即放回-20℃冰箱;若发现凝胶时间延长,应更换APS溶液。
  • PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关;可通过增加50%~100%的APS及TEMED的用量,加快PAGE凝胶的聚合速度,但凝胶聚合过快不利于操作。
  • 在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
  • 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作,加水时速度不能太快。
  • 丙烯酰胺具有神经毒性,操作时请穿戴实验服和一次性手套。



以0.75mm厚mini胶为例:
  • 灌制分离胶
    • 参照凝胶模具说明书,装配好模具。
    • 取相应体积的30% Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水(参照表1)在小烧杯或试管中混合。
    • 加入10% APS溶液和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
    • 注入模具(留少许以判断凝胶状态),避免产生气泡,凝胶混合液加至距前玻璃板顶端约1.5cm或距梳齿0.5cm,轻轻加入1mL水覆盖封胶,使分离胶表面保持平整。
    • 静置30~60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
  • 灌制浓缩胶
    • 倒掉覆盖在分离胶上的水层。
    • 将相应体积的30% Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和双蒸水(参照表2)在一个小烧杯或试管中混合。
    • 加入10% APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
    • 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面(留少许以判断凝胶状态,避免产生气泡,直至前玻璃板的顶端。
    • 将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
    • 静置30~60分钟,待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,避免破坏加样孔。
    • 进行常规电泳操作。使用Tris甘氨酸电泳液建议电泳条件:初始电压80V,约30分钟,样品进入分离胶后,电压调至120V,约1小时,样品抵达凝胶底部停止电泳。



问题分析
成胶速度慢或不成胶增加50~100%的APS用量,还不成胶需更换APS。
浓缩胶与分离胶界面不齐注入分离胶后需封胶,或检查模具是否漏液。
条带拖尾或有竖纹蛋白样品需离心去除不溶物或透析除盐。
条带呈笑脸型延长凝胶时间或适当降低电泳电压。
条带横向扩散减少上样量。



附表1.配制5mL非变性PAGE分离胶(组分体积单位mL)
胶浓度双蒸水30% Acr-Bis(29:1)分离胶缓冲液(4×)10%APSTEMED
6%2.751.01.250.050.004
8%2.421.331.250.050.003
10%2.081.671.250.050.002
12%1.752.01.250.050.002
15%1.252.51.250.050.002


附表2.配制2mL非变性PAGE浓缩胶(组份体积单位mL)
胶浓度双蒸水30% Acr-Bis(29:1)浓缩胶缓冲液(4×)10%APSTEMED
5%1.140.340.50.020.002


附表3.非变性PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
非变性PAGE分离胶浓度分离范围
6%50~150kD
8%30~90kD
10%20~80kD
12%12~60kD
15%10~40kD

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